電泳的結(jié)果檢測(cè)
對(duì)于不同的目的，應(yīng)采用不同的檢測(cè)方法。用染料和生物大分子結(jié)合形成有色的復(fù)合物是電泳后檢測(cè)最常用的方法。
聚丙烯酰胺凝膠電泳結(jié)果不正?，F(xiàn)象和對(duì)策
1．指示劑前沿呈現(xiàn)兩邊向上或向下的現(xiàn)象。向上的“微笑”現(xiàn)象說明凝膠的不均勻冷卻，中間部分冷卻不好，所以導(dǎo)致凝膠中分子有不同的遷移率所致。這種情況在用較厚的凝膠以及垂直電泳中時(shí)常發(fā)生。向下的“皺眉”現(xiàn)象常常是由于垂直電泳時(shí)電泳槽的裝置不合適引起的，特別是當(dāng)凝膠和玻璃板組成的“三明治”底部有氣泡或靠近隔片的凝膠聚合不完全便會(huì)產(chǎn)生這種現(xiàn)象。
2．“拖尾”現(xiàn)象是電泳中最常見的現(xiàn)象。這常常是由于樣品溶解不佳引起的，克服的辦法是在加樣前離心，選用合適的樣品緩沖液和凝膠緩沖液，加增溶輔助試劑。另一方法是降低凝膠濃度。
3．“紋理”現(xiàn)象常常是由于樣品中不溶顆粒引起的，克服辦法是增加溶解度和離心除去不溶性顆粒。
4．蛋白帶偏斜常常是由于濾紙條或電極放置不平行所引起的，或由于加樣位置偏斜而引起。
5．蛋白帶過寬，與鄰近蛋白泳道的蛋白帶相連，這是由于加樣量太多或加樣孔泄漏引起的。
6．蛋白帶模糊不清和分辨不佳是由于多種原因引起的。雖然梯度凝膠可以提高分辨率，但與其他方法相比，常規(guī)聚丙烯酰胺凝膠電泳是分辨率較低的方法。為了提高分辨率，不要加過多的樣品，小體積樣品可給出窄帶。加樣后應(yīng)立即電泳，以防止擴(kuò)散。選擇合適的凝膠濃度，使組分得以充分的分離。通?？拷把氐牡鞍讕Х直媛什患?，所以應(yīng)根據(jù)分子量與凝膠孔徑的關(guān)系，灌制足夠長(zhǎng)度的凝膠，以使樣品不會(huì)走出前沿。樣品的蛋白水解作用也引起擴(kuò)散而使分辨率降低。水解作用通常發(fā)生在樣品準(zhǔn)備的時(shí)候，系統(tǒng)中的內(nèi)源性蛋白酶會(huì)水解樣品蛋白，如果在緩沖液中加蛋白酶抑制劑可以減少這種情況的發(fā)生。
